牛奶和奶粉中6種聚醚類(lèi)抗生素殘留量測(cè)定分析條件的選擇

時(shí)間：2023-03-24 21:37:02來(lái)源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

牛奶和奶粉中6種聚醚類(lèi)抗生素殘留量測(cè)定分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-26 00:00

20.2.1.7 分析條件的選擇

(1)提取方法選擇

本方法對(duì)比了用甲醇、乙腈、乙酸乙酯作為提取溶劑的回收率。

1)用甲醇作為提取溶劑

稱(chēng)取5.0g(精確至0.01g)牛乳樣品于50mL離心管中，滴加5mol/L鹽酸調(diào)至pH約為4.6，并記錄鹽酸消耗量。加入15mL甲醇，渦旋混勻1min，置于50℃水浴30min，超聲波提取10min，以4000r/min離心10min。取上清液10mL，待凈化。

2)用乙腈作為提取溶劑

稱(chēng)取5.0g(精確至0.01g)牛乳樣品于50mL離心管中，加無(wú)水硫酸鈉約3g和乙腈15mL，旋緊蓋子，渦旋混勻1min，振蕩10min，以3000r/min離心3min。移取.上層乙腈10mL，40℃水浴減壓濃縮近干，用5mL甲醇-水(1+1，v/v)溶解殘?jiān)?，待凈化?/p>

3)用乙酸乙酯作為提取溶劑

稱(chēng)取5g(精確至0.01g)牛乳樣品于50mL離心管中，無(wú)水硫酸鈉約3g和乙酸乙酯15mL，旋緊蓋子，渦旋混勻1min，振蕩10min，以5000r/min離心10min。移取上層乙酸乙酯層于圓底燒瓶中，再加入乙酸乙酯10mL，重復(fù)上述步驟，合并乙酸乙酯層40℃水浴減壓濃縮近干，用于SPE凈化。

按照上述三種提取方法測(cè)定添加濃度為10μg/kg的牛奶樣品中聚醚類(lèi)抗生素回收率，每種方法做3個(gè)平行測(cè)定，見(jiàn)表20-5。對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果表明，用乙腈作為提取溶劑，基質(zhì)背景相對(duì)干凈，基線噪音低，對(duì)提高檢測(cè)靈敏度效果明顯，提取效率高穩(wěn)定，故選用乙腈作為提取溶劑。在加入無(wú)水硫酸鈉的條件下，渦旋混勻后，用超聲波提取10min，獲得穩(wěn)定、滿(mǎn)意的回收率。

(2)凈化方法的選擇

牛奶和奶粉樣品提取溶液的凈化，文獻(xiàn)方法主要是固相萃取法，也有未凈化直接進(jìn)樣的。本試驗(yàn)對(duì)比研究了用正己烷液液萃取除脂法、SPE法和GPC的凈化效果。牛奶類(lèi)樣品基質(zhì)復(fù)雜，尤其是配方奶粉中，存在多種維生素等添加成分，采用液-液萃取法凈化，不足以去除奶粉中的干擾物質(zhì);聚醚類(lèi)抗生素分子量分布范圍較寬(MW 612-934)，采用GPC凈化的收集時(shí)間長(zhǎng)，與脂肪有共流出時(shí)段，凈化效果不夠理想;本方法采用正己烷除脂后，Oasis HLB固相萃取柱凈化，有效去除了雜質(zhì)干擾，回收率均在85%～105%之間。

表20-5 比較三種提取方法的回收率(添加濃度為10μg/kg)

(3) 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析條件的確定

1) 優(yōu)化質(zhì)譜分析條件、確定母離子和監(jiān)測(cè)離子

采用注射泵直接進(jìn)樣方式，以10μL/min將聚醚類(lèi)抗生素的標(biāo)準(zhǔn)溶液注入串聯(lián)質(zhì)譜的離子源中。采用正離子掃描方式進(jìn)行-級(jí)質(zhì)譜分析，在選定的質(zhì)譜條件下，聚醚類(lèi)抗生素的產(chǎn)生穩(wěn)定的強(qiáng)峰,確定了母離子(尼日利亞菌素母離子為[M+NH4]+，其余5種抗生素母離子均為[M+Na]+)，優(yōu)化了電離電壓。對(duì)被測(cè)物的準(zhǔn)分子離子碰撞后，進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，得到子離子質(zhì)譜圖，選擇了監(jiān)測(cè)離子，確定子離子豐度，優(yōu)化了碰撞能量。還對(duì)離子源溫度、脫溶劑氣溫度、脫溶劑氣流量、錐孔反吹氣流量等參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。錐孔電壓、碰撞能量和駐留時(shí)間等質(zhì)譜參數(shù)及母離子和子離子詳見(jiàn)表20-2。六種聚醚類(lèi)抗生素的一級(jí)質(zhì)譜圖和二級(jí)質(zhì)譜圖見(jiàn)圖20-7至圖20-12。

圖20-7 拉沙洛菌素一級(jí)質(zhì)譜(左)和二級(jí)質(zhì)譜(右)圖

圖20-8 莫能菌素一級(jí)質(zhì)譜圖(左)和二級(jí)質(zhì)譜圖(右)

圖20-9 尼日利亞菌素一級(jí)質(zhì)譜圖(左)和二級(jí)質(zhì)譜圖(右)

圖20-10 鹽霉素一級(jí)質(zhì)譜圖(左)和二級(jí)質(zhì)譜圖(右)

圖20-11 甲基鹽霉素一級(jí)質(zhì)譜圖(左)和二級(jí)質(zhì)譜圖(右)

圖20-12 馬杜霉素一級(jí)質(zhì)譜圖(左)和二級(jí)質(zhì)譜圖(右)

2) 色譜條件的確定

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，選用通用性較強(qiáng)的BEH C18(1.7um，50mm×2.1mm)色譜柱，對(duì)混合標(biāo)樣進(jìn)行梯度洗脫，六種成分能得到很好的分離。用甲醇+水(含0.1%甲酸)為流動(dòng)相，采用簡(jiǎn)單的梯度洗脫模式，能使六種成分得到較好的分離，但峰型不對(duì)稱(chēng)，有些拖尾，在水系流動(dòng)相中加入5mmol/L乙酸銨后，峰形得到有效改善。確定的流動(dòng)相組成為：A為甲醇，B為0.1%甲酸+5mmol/L乙酸銨水溶液，梯度洗脫。

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