咪唑駢噻唑類藥物測(cè)定方法（二）

時(shí)間：2023-03-24 22:16:36來源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

咪唑駢噻唑類藥物測(cè)定方法（二）

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

(5)超臨界流體色譜法(supercritical fluid chromatography，SFC)

SFC是一種介于GC和HPLC之間的色譜技術(shù)。揉合了GC的高速度、高效率和HPLC的選擇性強(qiáng)、分離效能高等優(yōu)點(diǎn)，是一種有力的分離和檢測(cè)手段。Perkins等建立了同時(shí)檢測(cè)豬組織中左旋咪唑等藥物的SFC和SFC-MS方法。采用氨基鍵合固定相，以二氧化碳與甲醇改性劑作為流動(dòng)相，對(duì)藥物分離條件進(jìn)行了摸索，結(jié)果顯示盡管使用較高比例的改性劑，左旋咪唑仍然吸附在氰基鍵合、ODS2和硅基等酸性固定相上；同時(shí)研究了改性劑特性變化的影響，發(fā)現(xiàn)較低比例的改性劑能使左旋咪唑.與內(nèi)在的化合物及溶劑峰分離，同時(shí)也對(duì)采用傳送帶(MB)接口技術(shù)和改進(jìn)后的熱噴霧(TSP)接口技術(shù)的填充柱SFC-MS法進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)蒸發(fā)器溫度在80℃時(shí)左旋咪唑能夠產(chǎn)生大的響應(yīng)值。

(6)氣相色譜-質(zhì)譜法(gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)

GC-MS是殘留分析中常用的確證技術(shù)。目前也有用于左旋咪唑殘留分析的報(bào)道。徐靜等建立了測(cè)定動(dòng)物組織中左旋咪唑殘留的GC-MS方法。以乙酸乙酯進(jìn)行提取，分別以HCl溶液、KOH-二氯甲烷體系進(jìn)行兩次LLP凈化，依次消除提取液中的脂溶性雜質(zhì)和水溶性雜質(zhì)，最后進(jìn)入GC-MS，采用電子轟擊源(EI)電離檢測(cè)。在選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)模式下，以m/z148、176、204為定性離子，m/z204為定量離子進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證和定量檢測(cè)。結(jié)果表明，左旋咪唑含量在0.25～3.0mg/L范圍內(nèi)，方法的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999；方法LOQ為5μg/kg；雞肝、鴨肝、兔肝和豬肝樣品中的加標(biāo)回收率在76%～106%范圍內(nèi)，RSD小于9%。Trehy等報(bào)道了采用GC-MS測(cè)定尿液中左旋咪唑殘留的方法，并用于因使用可卡因?qū)е轮行粤＜?xì)胞減少或粒細(xì)胞缺乏癥的評(píng)價(jià)中。該方法在兩個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了驗(yàn)證測(cè)試，當(dāng)取樣量為5mL時(shí)，方法LOD為1ng/mL。Bertol等也采用GC-MS方法測(cè)定尿液中的左旋咪唑，并對(duì)左旋咪唑在馬、犬和人中的代謝進(jìn)行了研究。樣品經(jīng)LLE后，進(jìn)GC-MS分析，3個(gè)碎片離子定性，LOQ為0.15ng/mL。

(7)液相色譜-質(zhì)譜法(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS)

與LC的常規(guī)檢測(cè)器如UVD、PDA等相比較，質(zhì)譜檢測(cè)器(MSD)選擇性好、靈敏度高、定性能力強(qiáng)，因而可以簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟，減少樣品預(yù)處理過程。

1)單極四極桿質(zhì)譜(LC-MS)

Cannavan等建立了綿羊組織中左旋咪唑殘留的LC-熱噴霧(TSP)-MS檢測(cè)方法。色譜柱為L(zhǎng)i-Chrospher 60 RP-select B(125mm×4mmid，5um)，流動(dòng)相為含0.1mol/L醋酸銨的乙腈-四氫呋喃-三乙胺-水(350+50+2+598，v/v)，等度洗脫，流速1.0mL/min，TSP電離，選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)模式下檢測(cè)，以[M+H]+離子(m/z205)定量。方法的LOD為5ng/g，在肝臟、腎臟和肌肉組織的平均回收率分別為93%、85%和 9%。

Jedziniak等建立了牛奶中左旋咪唑等20種咪唑類藥物的篩查方法。采用乙酸乙酯提取，正已烷和酸化乙醇LLP凈化，LC-MS測(cè)定。采用XTerra MS C18(150mm×2.1mm，3.5um)色譜柱分離，柱溫30℃，流動(dòng)相為乙腈和0.025mol/L的乙酸銨溶液(乙酸調(diào)pH5.0)，梯度洗脫，流速0.2mL/min，在電噴霧正離子(ESIT)、SIM模式下檢測(cè)，以[M+H]+離子(m/z205)定量。在添加濃度5ug/kg、10μg/kg、15μg/kg范圍內(nèi)，回收率在84%～89%之間，CV小于9.8%；LOD在0.1～1.0μg/kg之間，L0Q在0.5～2.0ug/kg之間。

2)串聯(lián)四極桿質(zhì)譜(LC-MS/MS)

Baere等采用LC-MS/MS測(cè)定動(dòng)物血漿中的左旋咪唑。以LiChrospher 60 RP-select B(125mm×34mmid.5μm)作為分離柱，含有7.7%(體積比)四氫呋喃和0.3%(體積比)三乙胺的0.1mol/L乙酸銨溶液-乙腈(60+40，v/v)作為流動(dòng)相，流速0.2mL/min，MS/MS在ESI、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式下檢測(cè)，以甲基左旋咪唑作為內(nèi)標(biāo)定量。在0～0.5μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r大于0.99；LOQ為0.025μg/mL，LOD為0.009μg/mL；日內(nèi)、日間CV在歐盟要求的范圍之內(nèi)。Tong等建立了人血漿中左旋咪唑的LC-MS/MS檢測(cè)方法。采用HC-C18(150mm×4.6mm，5um)分離柱，40℃分離，流動(dòng)相為乙腈-10mmol/L乙酸銨(70+30，v/v)，流速為0.5mL/min，ESI+、MRM模式檢測(cè)，以甲苯咪唑?yàn)閮?nèi)標(biāo)定量。在0.1～30ng/mL范圍內(nèi)線性良好，LOQ為0.1ng/mL，CV小于8.5%。

De Ruyck等建立了牛奶中左旋咪唑等驅(qū)蟲藥多殘留的LC-ESI-MS/MS檢測(cè)方法。采用Alltima C18(15mm×2.1mm，5um)作為分離柱，0.1%甲酸溶液-乙腈為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.25mL/min，在ESIt、MRM模式下檢測(cè)，以甲苯咪唑?yàn)閮?nèi)標(biāo)定量。左旋咪唑回收率在89.6%～102.9%之間，RSD在6.1%～8.3%之間，LOD為0.5μg/kg。薄海波等建立了UPLC-MSMS測(cè)定牛奶和奶粉中左旋咪唑殘留量的方法。采用BEH C18超高效液相色譜柱，以乙腈-0.1%甲酸(15+85，v/v)為流動(dòng)相，流速為0.25mL/min，在ESI+、MRM模式下進(jìn)行質(zhì)譜分析。結(jié)果表明，在2.0～100.0μg/L濃度范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r為0.997；在低、中、高3個(gè)添加水平下，回收率為64.5%～102.0%，RSD小于13.1%；牛奶中的LOD為0.4μg/kg，奶粉為2.0μg/kg。Whelan等報(bào)道了牛奶中驅(qū)蟲藥殘留的UPLC-快速極性切換-MS/MS檢測(cè)方法。分析柱為HSST3(100mm×2.1mm，1.8um)，流動(dòng)相為0.01%冰醋酸-乙腈(90+10，v/v)和含5mmol/L甲酸銨的甲醇溶液-乙腈(75+25，v/v)，梯度洗脫，流速為0.6mL/min，質(zhì)譜用ESI、MRM模式檢測(cè)，以氘代藥物作為內(nèi)標(biāo)定量。該方法使用電離子化的快速極性切換技術(shù)、單針進(jìn)樣就可同時(shí)檢測(cè)正、負(fù)離子，運(yùn)行時(shí)間為13min，能夠檢測(cè)包括左旋咪唑在內(nèi)的幾乎所有驅(qū)蟲藥。方法的CCa為0.83μg/kg，CCβ為1.4μg/kg，回收率在94%～104%之間。

Garrido Frenich等采用UPLC-MS/MS方法同時(shí)測(cè)定雞蛋中包括咪唑類驅(qū)蟲藥在內(nèi)的多種藥物殘留。分析柱為Acquity UPLC BEH C18(100mm×2.1mm，1.7um)，流動(dòng)相為甲醇和0.05%的甲酸溶液，流速為0.3mL/min，進(jìn)樣量5μL，柱溫30℃，毛細(xì)管電壓3.0kV，源溫度120℃，脫溶劑溫度350℃，錐孔氣流量80L/h，脫溶劑氣流量600L/h，ESI模式監(jiān)測(cè)。在10μg/kg和100μg/kg兩個(gè)濃度水平下，左旋咪唑回收率分別為118.5%和94.8%，日間CV為14.6%，方法LOQ為0.1μg/kg。Cherlet等建立了豬組織中左旋咪唑殘留的LC-大氣壓化學(xué)電離(APCI)-MS/MS檢測(cè)方法。采用正已烷-異戊醇(95+5，v/v)提取豬組織中的左旋咪唑，以LiChrospher 60 RP-select B(125mm×34mm，5μm)為色譜分離柱，含有7.7%(體積比)四氫呋喃和0.3%(體積比)三乙胺的0.1mol/L乙酸銨溶液和乙腈為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為1.0mL/min。質(zhì)譜在正離子模式電離，對(duì)左旋咪唑主要離子產(chǎn)物m/z178.0進(jìn)行選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)模式檢測(cè)，用甲基左旋咪唑?yàn)閮?nèi)標(biāo)定量。在豬肌肉、腎臟、皮膚+脂肪組織中的LOQ為5ug/kg，肝臟為50μg/kg；LOD在2～4μg/kg之間；日內(nèi)CV小于20.1%，日間CV小于11.7%。Lopes等開發(fā)了同時(shí)檢測(cè)金頭鯛中左旋咪唑等32種獸藥殘留的方法。采用改進(jìn)的QuEChERS方法提取，乙腈～甲醇(75+25，v/v)作為提取溶劑，UPLC-MS/MS測(cè)定。在10μg/kg、25μg/kg、50μg/kg和100μg/kg添加濃度，方法平均回收率在69%～125%之間，日內(nèi)和日間RSD分別小于20%和30%；LOD和LOQ分別為7.5μg/kg和25μg/kg，CCa為16.7ug/kg，CCβ為23.5ug/kg。

3)離子阱質(zhì)譜(LC-MSn)

Gallo等報(bào)道了采用LC-MSn測(cè)定飼料中左旋咪唑的分析方法。樣品經(jīng)LLE提取后，直接進(jìn)儀器檢測(cè)。采用反相色譜分離，ESI電離，MSn測(cè)定。利用MSn可做多級(jí)質(zhì)譜分析的特點(diǎn)，監(jiān)測(cè)2個(gè)子離子。該方法按照歐盟法規(guī)882/2004/EC對(duì)重現(xiàn)性、耐用性、特異性和定量限進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)驗(yàn)證，結(jié)果表明該方法可靠，適用于豬、牛、兔子和家禽飼料。該方法平均回收率超過92%，RSD小于15.2%；LOQ為2.0mg/kg。

4) 飛行時(shí)間質(zhì)譜(LC-QTOF/MS)

Hess等報(bào)道了尿液中左旋咪唑及其代謝物阿米雷司的LC-QTOF/MS分析方法。該方法在2.5～250ng/mL范圍呈良好線性；左旋咪唑和阿米雷司的LOD分別為0.51ng/mL、0.65ng/mL，LOQ為1.02ng/mL和0.76ng/mL；方法準(zhǔn)確度為-1.96%～-14.3%(左旋咪唑)、-11.9%～-18.5%(阿米雷司)，日間精密度為8.36%～10.9%(左旋咪唑)、5.75%～11.0%(阿米雷司)，日內(nèi)精密度為10.9%～16.9%(左旋咪唑)、7.64%～12.7%(阿米雷司)。

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