硫脲嘧啶類藥物測(cè)定方法（三）

時(shí)間：2023-03-24 21:56:09來源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

硫脲嘧啶類藥物測(cè)定方法（三）

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

(7)毛細(xì)管電泳法(capilliary electrophoresis，CE)

CE作為一種常見的色譜方法也被應(yīng)用于動(dòng)物基質(zhì)或飼料中硫脲嘧啶類藥物的檢測(cè)，通常配備激光介導(dǎo)熒光檢測(cè)器(LIFD)和電化學(xué)檢測(cè)器(ECD)等，但是，其特異性和靈敏度尚不能滿足有效監(jiān)控的要求。

PerezRuiz等采用CE測(cè)定了飼料和尿液中的硫脲嘧啶和苯基硫脲嘧啶。分析物在強(qiáng)堿條件下經(jīng)5-IAF衍生化后，采用CE-LIFD檢測(cè)。樣品采用高壓注射(0.5psi，5s)進(jìn)樣，常規(guī)電極分析，電壓12kV，電流約50mA。分離采用未涂層的熔融石英毛細(xì)管(75umi.d，375umo.d.)，長(zhǎng)57cm(有效長(zhǎng)度50cm)，柱溫25℃，運(yùn)行緩沖液為20mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH10)。LIFD系統(tǒng)包括一個(gè)空氣冷卻的3mW氬離子激光(激發(fā)波長(zhǎng)488nm)，一個(gè)陷波濾波器(488nm)和一個(gè)選擇性檢測(cè)產(chǎn)生熒光的帶通濾波器(520nm)。該方法線性范圍為0.1～11umol/L，回收率在75%～92%之間，RSD小于3%。Kong等采用CE-ECD建立了同時(shí)檢測(cè)飼料中5種硫脲嘧啶類藥物的分析方法。采用自制的壁射流ECD檢測(cè)器，鉑盤工作電極(300um i.d.)，檢測(cè)分析物氧化電流。在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下，5種藥物可在15min內(nèi)，在電壓16kV下，由20mmol/L硼酸鈉緩沖液(pH9.2)有效分離。甲巰咪唑的LOD為7.6ug/kg，丙基硫脲嘧啶為25ug/kg，苯基硫脲嘧啶為15ug/kg，硫脲嘧啶為18μg/kg，甲基硫脲嘧啶為20μg/kg。

(8)氣相色譜-質(zhì)譜法(gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)

色-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的飛速發(fā)展有力地促進(jìn)了硫脲嘧啶類藥物殘留分析方法的進(jìn)步。色譜技術(shù)保證硫脲嘧啶類藥物高效分離的同時(shí)，質(zhì)譜技術(shù)為陽性樣品的確證提供了豐富的結(jié)構(gòu)信息。衍生化后的硫脲嘧啶類藥物，GC-MS的檢測(cè)靈敏度可以降低到50ng/g以下，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)更可以降低到25ng/g以下。電子轟擊電離(EI)、化學(xué)電離(CI)技術(shù)均有應(yīng)用。

Yu等開發(fā)了牛肉中的硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、丙基硫脲嘧啶和苯基硫脲嘧啶的GC-MS分析方法。甲酯化衍生物進(jìn)GC-MS分析，HP UItra 2毛細(xì)管柱程序升溫分離，初始爐溫70℃，保持0.5min，以10℃/min升至90℃，再以20℃/min升至280℃，保持2.5min，250℃不分流進(jìn)樣，載氣為氦氣，流速1mL/min，質(zhì)譜溫度280℃，EI源電力，以選擇離子模式(SIM)模式監(jiān)測(cè)。該方法回收率在50%～90%之間，CV小于10%；硫脲嘧啶的LOQ為25μg/kg，其他藥物為15μg/kg。Liu等建立了動(dòng)物組織中5種硫脲嘧啶類藥物的殘留分析方法。PFBBr和MSTFA衍生產(chǎn)物用GC-MS測(cè)定，DB-5ms毛細(xì)管柱程序升溫分離，氦氣為載氣，流速1mL/min，初始爐溫100℃，保持2min，以15℃/min升至260℃，再以10℃/min升至290℃，保持5min，250℃進(jìn)樣，EI電離源，70eV電離能量，離子源溫度200℃，接口溫度250℃，SIM模式監(jiān)測(cè)。組織中的平均回收率在71.5%～96.9%之間，RSD低于10%；巰基苯并咪唑的LOD為10mg/kg，苯基硫脲嘧啶為5mg/kg，硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶和丙基硫脲嘧啶為2mg/kg。Zou等建立了牛奶與尿液中硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、丙基硫脲嘧啶、苯基硫脲嘧啶和甲巰咪唑的殘留分析方法。PFBBr和MSTFA衍生產(chǎn)物用GC-MS測(cè)定，DB-5MS毛細(xì)管柱程序升溫分離，載氣為高純氦氣，流速1mL/min，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度250℃，離子源溫度200℃，接口溫度250℃，EI電離源，70eV，SIM模式監(jiān)測(cè)。5種藥物的回收率在70%以上，RSD在2.1%～7.9%之間；甲巰咪唑的LOD為0.004μg/g，其他藥物為0.0016μg/g。陳華宜等建立了GC-MS測(cè)定豬腎中硫脲嘧啶類藥物的篩選方法，不需要衍生化，直接進(jìn)樣檢測(cè)。采用HP-5MS彈性石英毛細(xì)管柱分離，進(jìn)樣口溫度250℃，柱溫70℃保持0.6min，以25℃/min的速度升至200℃，保持5.2min，不分流進(jìn)樣，載氣為高純氦氣，柱流量1.0mL/min；質(zhì)譜接口溫度280℃，EI源電子能70eV，電子倍增器電壓2094V，全掃描方式(full scan)，掃描范圍35～550分子量。結(jié)果在一份豬腎樣品中檢出了N，N-二甲基硫脲和甲巰咪唑。

Batjoens等建立了一種測(cè)定尿液中4種硫脲嘧啶類藥物的氣相色譜-離子阱質(zhì)譜(GC-MSn)分析方法，即使在提取和凈化的損失較大的情況下，靈敏度仍可以達(dá)到50ppb。采用HP Ultra 2毛細(xì)管色譜柱，初始柱溫100℃，以15℃/min升到200℃，再以30℃/min升到300℃，保持3min，進(jìn)樣溫度260℃，傳輸線溫度300℃，載氣為氦氣，掃描范圍80～400分子量，EI電離。MSTFA衍生化產(chǎn)物通過一級(jí)質(zhì)譜全掃描篩查；發(fā)現(xiàn)可以結(jié)果時(shí)，再采用二級(jí)質(zhì)譜查找子離子確證。Pensabene等也建立了組織中4種硫脲嘧啶類藥物的GC-MSn確證方法。MSTFA衍生物采用Rtx-5MS毛細(xì)管柱(30m×0.25mmid，0.25um)程序升溫分離，EI電離，二級(jí)質(zhì)譜確證，確證濃度可以達(dá)到0.1μg/g。

Le Bizec等報(bào)道了甲狀腺中6種硫脲嘧啶類藥物的GC-MS分析方法。PFBBr和MSTFA衍生產(chǎn)物用GC-MS檢測(cè)，傳輸線溫度280℃，進(jìn)樣口溫度250℃，HP-1毛細(xì)管柱程序升溫分離，氦氣為載氣，流速1mL/min，采用負(fù)化學(xué)源電離(NCI)，氨氣為反應(yīng)氣，SIM模式監(jiān)測(cè)，檢測(cè)限優(yōu)于1ng/g，方法回收率在40%～70%之間。該研究還同時(shí)在EI電離和正化學(xué)源電離(PCI)模式下，進(jìn)行了特異性分析。

(9)液相色譜-質(zhì)譜法(liquid chromatography. mass spectrometry，LC-MS)

LC-MS技術(shù)，特別是液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)技術(shù)的完善，有效地促進(jìn)了硫脲嘧啶類藥物殘留測(cè)定方法的進(jìn)步，目前已成為硫脲嘧啶類藥物殘留分析的主要手段。常用的接口技術(shù)有大氣壓化學(xué)電離源(APCI)和電噴霧電離源(ESI)。

Blanchflower等中率先報(bào)道利用LC-MS技術(shù)測(cè)定了牛尿和甲狀腺中的5種硫脲嘧啶類藥物。Prodigy ODS3反相色譜柱(150mm×4.6mm i.d.)分離，含0.1%七氟丁酸的去離子水和55%甲醇溶液(含0.1%七氟丁酸)為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速1mL/min，采用APCI源，源溫150℃，APCI探針溫度450℃，鞘氣和干燥氣流速分別為50L/h和200L/h，SIM模式監(jiān)測(cè)[M+H]+。該方法添加回收率在48.1%～95.8%之間，檢出限在25ng/g以下。

De Wasch等運(yùn)用液相色譜-離子阱質(zhì)譜(LC-MSn)測(cè)定了甲狀腺和肉中6種硫脲嘧啶類藥物的NBD-CI衍生物。用Symmetry C18色譜柱(5um，150mm×2.1mm)分離，甲醇和0.73%乙酸溶液為流動(dòng)相，線性梯度洗脫，ESI+電離源，MSn監(jiān)測(cè)二級(jí)子離子。該方法CCβ為20ng/g。

Pinel等運(yùn)用LC-MS/MS技術(shù)，將牛尿中硫脲嘧啶類藥物3IBBr衍生物的檢測(cè)限降低到ng/g級(jí)別。采用Nucleosil C18AB色譜柱(5um，2.5mm×50mm)分離，甲醇-0.5%乙酸為流動(dòng)相梯度洗脫，流速0.3mL/min，ESI-電離源，毛細(xì)管電壓3kV，錐孔電壓40V，源溫120℃，去溶劑溫度300℃，氮?dú)鉃殪F化氣和輔助氣，流速分別為90L/h和600L/h，氬氣為碰撞氣，碰撞電壓40eV，選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)模式檢測(cè)。方法CCa在0.1～5.2μg/L之間，CCβ在2.6～23.2μg/L之間。邱元進(jìn)等建立了牛奶中甲巰咪唑、硫脲嘧啶、甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和2-巰基苯并咪唑6種硫脲嘧啶類藥物殘留的LC-MS/MS分析方法。4-碘芐溴衍生物用Luna C18色譜柱分離，乙腈和5mmol/L乙酸銨溶液(含0.2%甲酸)進(jìn)行梯度洗脫，ESI、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明：牛奶中6種目標(biāo)物在優(yōu)化條件下分離良好，響應(yīng)值高，峰形尖銳對(duì)稱，在5～100μg/kg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)廠均大于0.99；檢出限為0.14～0.32μg/kg，定量限為0.48～1.1ug/kg；10ug/kg、20μg/kg和50μg/kg添加水平的平均回收率為82.8%～113.6%，RSD為2.4%～14.3%。

Lohmus等首先報(bào)道了采用UPLC-MS/MS測(cè)定尿液和甲狀腺中甲巰咪唑、硫脲嘧啶、甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和2-巰基苯并咪唑的3IBBr衍生物的殘留分析方法。衍生后的硫脲嘧啶類藥物用Acquity UPLCTM BEHC18色譜柱(1.7μm，2.1mm×100mm)分離，水-乙腈-乙酸溶液(80+20+0.1，v/v)和水-乙腈-乙酸溶液(10+90+0.1，v/v)為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速0.5mL/min，ESI電離源，正負(fù)離子切換，SRM模式監(jiān)測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量。方法CCa和CCβ均低于10μg/kg。VandenBussche等也采用UPLC-MS/MS測(cè)定尿液中的8種硫脲嘧啶類藥物。凈化后的該類藥物不用衍生，直接UPLC-MS/MS測(cè)定。用Acquity UPLCHSST3柱(1.8μm，100mm×2.1mm)分離，0.1%甲酸和含0.1%甲酸的甲醇溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，流速0.3mL/min，三重四極桿質(zhì)譜分析，ESI+電離源，噴霧電壓3.5kV，霧化和毛細(xì)管溫度分別為370℃和300℃，SRM模式監(jiān)測(cè)。方法線性系數(shù)在0.982～0999之間；CCa在1.1～5.5μg/L之間，CCβ在1.7～7.5ug/L之間；RSD小于15.5%。

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